Transferencia de energía de resonancia de fluorescencia (FRET)
La transferencia de energía de resonancia de fluorescencia (FRET) es un proceso de transferencia de energía no radiativo en el que la energía del estado excitado del donante se transfiere al estado excitado aceptador a través de la interacción de parejas eléctricas intermoleculares. Este proceso no involucra fotones y, por lo tanto, no es radiativo. Este ensayo tiene las ventajas de ser rápido, sensible y simple.
El tinte utilizado en el ensayo FRET puede ser idéntico. Pero en la mayoría de las aplicaciones, se utilizan diferentes tintes. En resumen, la transferencia de energía de resonancia luminosa es la transferencia de un par de dipolos del donante (tinte 1) al aceptador (tinte 2) cuando el grupo de donantes está excitado. En general, el espectro de emisión del grupo de fluoróforo donante se superpone con el espectro de absorción del grupo de aceptores. "Cuando la distancia entre los dos fluoróforos es apropiada (10 - 100 A), se puede observar la transferencia de energía de fluoróforo del donante al aceptador". El método de transferencia de energía depende de la estructura química del receptor:
1. Se convierte en vibración molecular, es decir, la luz luminosa de la transferencia de energía desaparece. (El receptor es un apagón ligero)
2. La emisión es más intensa que el receptor mismo, lo que resulta en un desplazamiento al rojo en el espectro de fluorescencia secundaria ". (Los receptores son emisores luminosos).
El grupo de donantes (EDANS) y el gen aceptador (Dabcyl) están uniformemente vinculados al sustrato natural de la proteasa del VIH, y cuando el sustrato no está desconectado, Dabcyl puede quenó edans y luego se vuelve indetectable a la fluorina. Tras la desconexión de la proteasa del VIH-1, EDAN ya no se apaga por Dabcyl, y las luciferasas de Edans se pueden detectar posteriormente. La disponibilidad de inhibidores de la proteasa puede ser monitoreado por los cambios en la intensidad de fluorescencia de los EDAN.
Los péptidos FRET son herramientas convenientes para estudiar la no especificidad de la peptidasa. Dado que su proceso de reacción se puede monitorear continuamente, proporciona un método conveniente para detectar la actividad enzimática. El brillo producido después de la hidrólisis de enlaces péptidos por el donante/aceptador proporciona una medida de la actividad enzimática a las concentraciones nanomolares. Cuando el péptido FRET está intacto, muestra una desaparición repentina del flash interno, pero cuando cualquier enlace peptídico opuesto al donante/aceptador se rompe, libera un flash, que puede detectarse continuamente y la actividad enzimática se puede cuantificar.
Tiempo de publicación: 2025-07-02