Transferencia de energía por resonancia de fluorescencia (FRET)
La transferencia de energía por resonancia de fluorescencia (FRET) es un proceso de transferencia de energía no radiativa en el que la energía del estado excitado del donante se transfiere al estado excitado del aceptor mediante la interacción de pares eléctricos intermoleculares.Este proceso no involucra fotones y, por lo tanto, no es radiativo.Este ensayo tiene las ventajas de ser rápido, sensible y sencillo.
El tinte utilizado en el ensayo FRET puede ser idéntico.Pero en la mayoría de las aplicaciones, en realidad se utilizan tintes diferentes.En resumen, la transferencia de energía de resonancia luminosa es la transferencia de un par de dipolos del donante (tinte 1) al aceptor (tinte 2) cuando se excita el grupo donante.En general, el espectro de emisión del grupo fluoróforo donante se superpone con el espectro de absorción del grupo aceptor."Cuando la distancia entre los dos fluoróforos es adecuada (10 - 100 A), se puede observar la transferencia de energía del fluoróforo del donante al aceptor".El método de transferencia de energía depende de la estructura química del receptor:
1. Se convierte en vibración molecular, es decir, la luz luminosa de la transferencia de energía desaparece.(El receptor es un extintor de luz)
2. La emisión es más intensa que el propio receptor, lo que provoca un corrimiento al rojo en el espectro de fluorescencia secundaria”.(Los receptores son emisores luminosos).
El grupo donante (EDANS) y el gen aceptor (DABCYL) están unidos uniformemente al sustrato natural de la proteasa del VIH y, cuando el sustrato no está desconectado, DABCYL puede apagar EDANS y luego volverse indetectable para el flúor.Tras la desconexión de la proteasa del VIH-1, DABCYL ya no desactiva EDANS y posteriormente se pueden detectar las luciferasas de EDANS.La disponibilidad de inhibidores de proteasa puede controlarse mediante cambios en la intensidad de fluorescencia de EDANS.
Los péptidos FRET son herramientas convenientes para estudiar la inespecificidad de la peptidasa.Dado que su proceso de reacción se puede monitorear continuamente, proporciona un método conveniente para detectar la actividad enzimática.El brillo producido después de la hidrólisis de los enlaces peptídicos por parte del donante/aceptor proporciona una medida de la actividad enzimática en concentraciones nanomolares.Cuando el péptido FRET está intacto, muestra una desaparición repentina del flash interno, pero cuando cualquier enlace peptídico opuesto al donante/aceptor se rompe, libera un flash, que se puede detectar continuamente y luego se puede cuantificar la actividad enzimática.
Hora de publicación: 14 de agosto de 2023