Los antígenos de proteínas recombinantes a menudo tienen varios epítopos diferentes, algunos de los cuales son epítopos de secuencia y algunos son epítopos estructurales. Los anticuerpos policlonales obtenidos mediante la inmunización de animales con antígenos desnaturalizados son mezclas de anticuerpos específicos de epítopos individuales y pueden usarse en general para detectar estructuras naturales o proteínas objetivo desnaturalizadas. Un beneficio secundario del uso de proteínas desnaturalizadas como inmunógenos es que las proteínas desnaturalizadas tienden a ser más inmunogénicas y pueden estimular una fuerte respuesta inmune en los animales.
El sistema de expresión de Escherichia coli generalmente se elige para fines antigénicos porque es el sistema más costoso en términos de tiempo y dinero. Para mejorar la posibilidad de la expresión de la proteína objetivo y la conveniencia de la purificación, a veces solo se expresa un pequeño fragmento de la proteína objetivo, como un dominio específico.
La estructura tridimensional de las proteínas
El dominio específico de una proteína
Si el propósito de la preparación de anticuerpos es únicamente para la detección de WB, es económico y rápido usar el péptido pequeño sintético como antígeno, pero existe un riesgo de inmunogenicidad débil o no regenicidad debido a la selección inapropiada del segmento de péptidos. Dado que la preparación de anticuerpos requiere un período largo, dos o tres segmentos de péptidos diferentes a menudo se seleccionan para preparar anticuerpos utilizando antígeno polipéptido para garantizar la tasa de éxito del experimento.
Se requiere que la pureza del antígeno polipéptido para la inmunización sea mayor al 80%. Aunque en teoría una mayor pureza puede obtener anticuerpos con una mejor especificidad, en la práctica, los animales siempre producen una gran cantidad de anticuerpos no específicos, enmascarando así los beneficios de la pureza antígeno.
Además, la preparación de anticuerpos a partir de péptidos pequeños debe reticarse al antígeno portador apropiado para mejorar su inmunogenicidad. Dos portadores antigénicos comunes son KLH y BSA.
Tiempo de publicación: 2025-07-03