Los antígenos proteicos recombinantes suelen tener varios epítopos diferentes, algunos de los cuales son epítopos de secuencia y otros son epítopos estructurales.Los anticuerpos policlonales obtenidos mediante la inmunización de animales con antígenos desnaturalizados son mezclas de anticuerpos específicos de epítopos individuales y pueden usarse en general para detectar estructuras naturales o proteínas diana desnaturalizadas.Un beneficio secundario de utilizar proteínas desnaturalizadas como inmunógenos es que las proteínas desnaturalizadas tienden a ser más inmunogénicas y pueden estimular una fuerte respuesta inmune en los animales.
El sistema de expresión de Escherichia coli suele elegirse con fines antigénicos porque es el sistema más costoso en términos de tiempo y dinero.Para mejorar la posibilidad de expresión de la proteína diana y la conveniencia de la purificación, a veces sólo se expresa un pequeño fragmento de la proteína diana, tal como un dominio específico.
La estructura tridimensional de las proteínas.
El dominio específico de una proteína
Si el propósito de la preparación de anticuerpos es únicamente para la detección de wb, es económico y rápido usar un péptido pequeño sintético como antígeno, pero existe el riesgo de una inmunogenicidad débil o falta de regenicidad debido a una selección inapropiada del segmento peptídico.Dado que la preparación de anticuerpos requiere un período prolongado, a menudo se seleccionan dos o tres segmentos peptídicos diferentes para preparar anticuerpos utilizando antígeno polipeptídico para garantizar la tasa de éxito del experimento.
Se requiere que la pureza del antígeno polipeptídico para la inmunización sea superior al 80%.Aunque en teoría una mayor pureza puede obtener anticuerpos con mejor especificidad, en la práctica los animales siempre producen una gran cantidad de anticuerpos no específicos, enmascarando así los beneficios de la pureza del antígeno.
Además, la preparación de anticuerpos a partir de péptidos pequeños debe entrecruzarse con el antígeno portador apropiado para mejorar su inmunogenicidad.Dos portadores antigénicos comunes son KLH y BSA.
Hora de publicación: 23-mar-2023