Como instrumento de alta precisión, HPLC puede conducir fácilmente a algunos problemas pequeños problemáticos si no se opera de la manera correcta durante el uso. Uno de los problemas más comunes es el problema de compresión de la columna. Cómo solucionar rápidamente un cromatógrafo defectuoso. El sistema HPLC consiste principalmente en una botella de depósito, una bomba, un inyector, una columna, una cámara de temperatura de columna, un detector y un sistema de procesamiento de datos. Para todo el sistema, los pilares, bombas y detectores son los componentes clave y las ubicaciones principales que son propensas a los problemas.
La clave para la presión de la columna es el área que necesita atención al usar HPLC. La estabilidad de la presión de la columna está estrechamente relacionada con la forma del pico cromatográfico, la eficiencia de la columna, la eficiencia de separación y el tiempo de retención. La estabilidad de la presión de la columna no significa que el valor de presión sea estable con un valor estable, sino que el rango de fluctuación de presión está entre 345 kPa o 50psi (permitiendo el uso de elución de gradiente cuando la presión de la columna está estable y cambia lentamente). Demasiado alta o demasiado baja presión es un problema de presión de columna.
Los más propensos a las fallas y soluciones de HPLC
1, la alta presión es el problema más común en el uso de HPLC. Esto significa un aumento repentino de la presión. En general, existen las siguientes razones: (1) En general, esto se debe al bloqueo del canal de flujo. En este punto, debemos examinarlo por partes. a. Primero, corte la entrada de la bomba de vacío. En este punto, el tubo de vista se llenaba con líquido para que el tubo de vista fuera más pequeño que la botella de solvente para ver si el líquido goteaba a voluntad. Si el líquido no está goteando o goteando lentamente, el cabezal del filtro de solvente está bloqueado. Tratamiento: Remoje en ácido nítrico al 30% durante media hora y enjuague con agua ultrapura. Si el líquido gotea al azar, el cabezal del filtro de solvente es normal y se está marcando; b. Abra la válvula de purga para que la fase móvil no pase a través de la columna, y si la presión no se reduce significativamente, la cabeza blanca del filtro está bloqueada. Tratamiento: los puntos blancos filtrados se eliminaron y se sonicaron con isopropanol al 10% durante media hora. Suponiendo que la presión cae por debajo de 100 pSi, la cabeza blanca filtrada es normal y se está marcando; do. Retire el extremo de salida de la columna, si la presión no disminuye, la columna está bloqueada. Tratamiento: si se trata de un bloqueo de sal de tampón, enjuague el 95% hasta que la presión sea normal. Si la obstrucción es causada por un material más altamente conservado, un flujo más fuerte que la fase móvil actual debe usarse para apresurarse hacia la presión normal. Si la presión de limpieza a largo plazo no disminuye de acuerdo con el método anterior, la entrada y la salida de la columna pueden estar conectadas al instrumento en contrario, y la columna puede limpiarse con la fase móvil. En este momento, si la presión de la columna aún no se reduce, la placa de tamiz de entrada de la columna solo se puede reemplazar, pero una vez que la operación no es buena, es fácil conducir a la reducción del efecto de la columna, así que intente usar menos. Para problemas difíciles, se puede considerar el reemplazo de columnas.
(2) Configuración de flujo incorrecto: la velocidad de flujo correcta se puede restablecer.
(3) Relación de flujo incorrecto: el índice de viscosidad de diferentes proporciones de flujos es diferente, y la presión del sistema correspondiente del flujo con mayor viscosidad también es mayor. Si es posible, los solventes de menor viscosidad se pueden reemplazar o volver a establecer y prepararse.
(4) Presión del sistema Drift cero: ajuste el cero del sensor de nivel de líquido.
2, la presión es demasiado baja (1) generalmente es causada por la fuga del sistema. Qué hacer: encuentre cada conexión, especialmente la interfaz en ambos extremos de la columna, y apriete el área de fuga. Retire el poste y apriete o alinee la película PTFE con la fuerza adecuada.
(2) El gas ingresa a la bomba, pero la presión suele ser inestable en este momento, alto y bajo. Más en serio, la bomba no podrá absorber el fluido. Método de tratamiento: Abra la válvula de limpieza y limpie a una velocidad de flujo de 3 ~ 5 ml/min. Si no, las burbujas de aire se aspiraron en la válvula de escape usando un tubo de aguja dedicado.
(3) Sin flujo de salida de fase móvil: verifique si hay una fase móvil en la botella del depósito, si el fregadero está sumergido en la fase móvil y si la bomba está funcionando.
(4) La válvula de referencia no está cerrada: la válvula de referencia está cerrada después de la desaceleración. Por lo general, se reduce a 0.1. ~ 0.2ml/ min después de cerrar la válvula de referencia.
Resumen:
En este artículo, solo se analizan problemas comunes en la cromatografía líquida. Por supuesto, en nuestra aplicación práctica, encontraremos más otros problemas. En el manejo de fallas, debemos seguir los siguientes principios: solo cambiar un factor a la vez para determinar la relación entre el factor hipotético y el problema; En general, al reemplazar las piezas para la resolución de problemas, debemos prestar atención a volver a poner las partes intactas desmanteladas en su lugar para evitar desechos; Formar un buen hábito discográfico es la clave para el éxito del manejo de fallas. En conclusión, al usar HPLC, es importante prestar atención al pretratamiento de la muestra y el funcionamiento y el mantenimiento adecuados del equipo.
Tiempo de publicación: 2025-07-02