Los más propensos a fallos y soluciones de HPLC

Como instrumento de alta precisión, la HPLC puede provocar fácilmente algunos pequeños problemas si no se utiliza de la forma correcta durante su uso.Uno de los problemas más comunes es el problema de compresión de la columna.Cómo solucionar rápidamente un cromatógrafo defectuoso.El sistema HPLC consta principalmente de una botella reservorio, una bomba, un inyector, una columna, una cámara de temperatura de la columna, un detector y un sistema de procesamiento de datos.Para todo el sistema, los pilares, las bombas y los detectores son los componentes clave y las principales ubicaciones propensas a tener problemas.

La clave para la presión de la columna es el área que necesita mucha atención cuando se utiliza HPLC.La estabilidad de la presión de la columna está estrechamente relacionada con la forma del pico cromatográfico, la eficiencia de la columna, la eficiencia de la separación y el tiempo de retención.La estabilidad de la presión de la columna no significa que el valor de la presión sea estable en un valor estable, sino más bien que el rango de fluctuación de la presión está entre 345 kPa o 50 PSI (lo que permite el uso de elución en gradiente cuando la presión de la columna es estable y cambia lentamente).Una presión demasiado alta o demasiado baja es un problema de presión de la columna.

Los más propensos a fallos y soluciones de HPLC

1, la alta presión es el problema más común en el uso de HPLC.Esto significa un aumento repentino de la presión.En general, existen las siguientes razones: (1) En general, esto se debe al bloqueo del canal de flujo.Llegados a este punto, deberíamos examinarlo por partes.a.Primero, corte la entrada de la bomba de vacío.En este punto, el tubo de PEEK se llenó con líquido de modo que el tubo de PEEK fuera más pequeño que la botella de disolvente para ver si el líquido goteaba a voluntad.Si el líquido no gotea o gotea lentamente, el cabezal del filtro de disolvente está bloqueado.Tratamiento: Remojar en ácido nítrico al 30% durante media hora y enjuagar con agua ultrapura.Si el líquido gotea aleatoriamente, el cabezal del filtro de disolvente está normal y se está revisando;b.Abrir la válvula de Purga para que la fase móvil no pase por la columna, y si la presión no se reduce significativamente, el cabezal blanco del filtro queda bloqueado.Tratamiento: Se eliminaron los puntos blancos filtrados y se sonicaron con isopropanol al 10% durante media hora.Suponiendo que la presión cae por debajo de 100 PSI, la cabeza blanca filtrada es normal y se está revisando;C.Retire el extremo de salida de la columna, si la presión no disminuye, la columna está bloqueada.Tratamiento: Si se trata de un bloqueo de sal tampón, enjuague al 95% hasta que la presión sea normal.Si la obstrucción es causada por algún material mejor conservado, se debe utilizar un flujo más fuerte que el de la fase móvil actual para acelerar hacia la presión normal.Si la presión de limpieza a largo plazo no disminuye según el método anterior, se puede considerar que la entrada y salida de la columna están conectadas al instrumento, por el contrario, y la columna se puede limpiar con la fase móvil.En este momento, si la presión de la columna aún no se reduce, la placa del tamiz de entrada de la columna solo se puede reemplazar, pero una vez que el funcionamiento no es bueno, es fácil que se reduzca el efecto de la columna, así que intente usar menos.Para problemas difíciles, se puede considerar el reemplazo de la columna.

(2) Configuración de caudal incorrecta: se puede restablecer el caudal correcto.

(3) Relación de flujo incorrecta: el índice de viscosidad de diferentes proporciones de flujos es diferente y la presión correspondiente del sistema del flujo con mayor viscosidad también es mayor.Si es posible, se pueden reemplazar o reajustar y preparar disolventes de menor viscosidad.

(4) Deriva del cero de la presión del sistema: ajuste el cero del sensor de nivel de líquido.

2, la presión es demasiado baja (1) generalmente se debe a una fuga del sistema.Qué hacer: busque cada conexión, especialmente la interfaz en ambos extremos de la columna, y apriete el área de la fuga.Retire el poste y apriete o forre la película de PTFE con la fuerza adecuada.

(2) El gas ingresa a la bomba, pero la presión suele ser inestable en este momento, alta y baja.Más gravemente, la bomba no podrá absorber el líquido.Método de tratamiento: abra la válvula de limpieza y limpie a un caudal de 3 ~ 5 ml/min.De lo contrario, se aspiraron burbujas de aire en la válvula de escape utilizando un tubo de aguja exclusivo.

(3) Sin salida de fase móvil: verifique si hay una fase móvil en la botella del depósito, si el fregadero está sumergido en la fase móvil y si la bomba está funcionando.

(4) La válvula de referencia no está cerrada: la válvula de referencia está cerrada después de la desaceleración.Suele bajar a 0,1.~ 0,2 ml/min después de cerrar la válvula de referencia.

Resumen:

En este artículo sólo se analizan problemas comunes en la cromatografía líquida.Por supuesto, en nuestra aplicación práctica, encontraremos más problemas.En el manejo de fallas, debemos seguir los siguientes principios: cambiar solo un factor a la vez para determinar la relación entre el factor hipotético y el problema;Generalmente, al reemplazar piezas para solucionar problemas, debemos prestar atención a volver a colocar las piezas intactas desmanteladas en su lugar para evitar desperdicios;Formar un buen hábito de registro es la clave para el éxito del manejo de fallas.En conclusión, al utilizar HPLC, es importante prestar atención al pretratamiento de la muestra y al correcto funcionamiento y mantenimiento del equipo.