El tripéptido reactivo de Limulus es una sustancia tripéptido con una secuencia específica extraída del lisado de células sanguíneas de cangrejo herradura o sintetizada artificialmente. El tripéptido reactivo de Limulus es un sustrato cromogénico utilizado para análisis cuantitativos (como la prueba de endotoxinas bacterianas) para detectar y medir los componentes de bacterias gramnegativas.—endotoxinas. Cuando actúan sobre enzimas activadas por endotoxinas, se libera un compuesto coloreado (como p-nitroanilina), lo que permite medir la intensidad del color y correlacionarla con el contenido de endotoxinas.
Principio de funcionamiento
Activación de endotoxinas: en presencia de endotoxinas, los amebocitos en la sangre del cangrejo herradura liberan enzimas, lo que desencadena la cascada de coagulación.
Acción enzimática: la enzima activada (generalmente enzima de coagulación) actúa sobre un sustrato cromogénico.
Reacción cromogénica: la enzima escinde el sustrato y libera un compuesto amarillo llamado p-nitroanilina (pNA).
Análisis cuantitativo: La intensidad del color amarillo es proporcional al contenido de endotoxinas en la muestra y generalmente se mide usando un espectrofotómetro a una absorbancia de 405 nm.
Métodos de preparación
El tripéptido reactivo de Limulus se puede obtener mediante dos enfoques en términos de preparación.
1. Extracción de componentes naturales de las células sanguíneas de Limulus y obtención del tripéptido activo mediante separación y purificación.
2. Usar tecnología de síntesis en fase sólida para conectar secuencialmente secuencias de aminoácidos específicas, controlando con precisión la estructura del tripéptido.
Debido a las políticas de conservación del Limulus (provincias como Zhejiang, Fujian, Guangdong y Guangxi lo incluyen como "fauna silvestre acuática protegida clave provincial" / Hong Kong emitió regulaciones a finales de 2012 que prohíben la pesca de arrastre de fondo), y debido a que el proceso de extracción es complejo y desafiante, el costo del primer método es relativamente alto. Por lo tanto, actualmente se utiliza comúnmente la síntesis en fase sólida. Al conectar secuencialmente secuencias de aminoácidos específicas, se puede controlar con precisión la estructura del tripéptido. Este método no solo garantiza la estabilidad y consistencia del producto, sino que también permite la producción a gran escala, satisfaciendo las necesidades de reactivos de prueba de la industria farmacéutica.
Hora de publicación: 2025-11-04