Fondo
Melanotan I, también conocido como Afamelanotide, es un polipéptido lineal compuesto de 13 aminoácidos que está preparado para desempeñar un papel cada vez más importante en la investigación farmacéutica. Los nombres principales en inglés de Melanotan I son Melanotan-1 y Afamelanotide. Como análogo sintético de la hormona estimulante de los melanocitos α (MSH), Melanotan I puede usarse para tratar los trastornos de fotosensibilidad causados por la protoporfiria eritropoyética. Actualmente, la mayoría de los productos Melanotan I están etiquetados para uso exclusivo en investigación y aún no están destinados a su aplicación en humanos. En la síntesis tradicional en fase sólida, la elección de la resina afecta significativamente la eficiencia del acoplamiento y la pureza final del producto.
Información básica
Nombre chino: Melanotan 1
Nombre en inglés: Melanotan-1
Número de empresa: GT-A006
CAS No.: 75921-69-6
Secuencia: SYS{Ne}EH{D-Phe}RWGKPV-NH2
Fórmula molecular: C78H111N21O19
Peso molecular: 1646,88
Método de preparación
I. Preparación de resina Fmoc-Val-Amino
Paso 1:Pesar 11,11 g (5 mmol) de resina Ramage Amide AM con un grado de sustitución de 0,45 mmol/g y añadirlo a un reactor de fase sólida. Agregue DCM para hinchar la resina durante 30 minutos y luego escurra. Lavar tres veces con DMF. Añadir una solución de DMF que contenga 20% de piperidina (v/v) y reaccionar durante 5 minutos. Agregue otra solución de piperidina DMF al 20% y reaccione durante 10 minutos, con un lavado de DMF en el medio. Una vez completada la reacción, escurrir y lavar tres veces con DMF.
Paso 2:Disolver 5,09 g de Fmoc-Val-OH, 2,02 g de HOBT (1-hidroxibenzotriazol) y 2,32 ml de DIC (N,N'-diisopropilcarbodiimida) en DMF a 0 °C. Después de la disolución completa, se añade la mezcla a la columna de reacción y se reacciona a temperatura ambiente durante 1 hora. Monitoree el progreso de la reacción utilizando la prueba de ninhidrina, asegurando un resultado negativo. Una vez completada la reacción, lave tres veces con DMF para obtener resina Fmoc-Val-amino.
II. Preparación de péptido de resina totalmente protegido de Melanotan I.
Paso 1:Agregue 20% de piperidina en solución de DMF (relación en volumen) a la Fmoc-Val-aminoresina anterior. Reaccionar durante 5 minutos, luego agregar otra porción de piperidina al 20% en solución de DMF y reaccionar durante 10 minutos. Lavar una vez con DMF durante el intervalo. Una vez completada la reacción, secar al vacío y lavar tres veces con DMF.
Paso 2:Disolver 5,06 g de Fmoc-Pro-OH, 2,02 g de HOBT (1-hidroxibenzotriazol) y 2,32 ml de DIC (N,N'-diisopropilcarbodiimida) en DMF a 0 °C. Después de la disolución completa, se añade la mezcla a la columna de reacción y se reacciona a temperatura ambiente durante 1 hora. Controle el progreso de la reacción mediante la prueba de ninhidrina (prueba de Kaiser) hasta obtener resultados negativos. Al finalizar, lave tres veces con DMF para obtener Fmoc-Pro-Val-aminoresin.
Paso 3:Siguiendo el método descrito en el Paso 2, acople secuencialmente cada aminoácido según la secuencia de Melanotan I. Después de completar la reacción de acoplamiento Ac-Ser(tBu)-OH, lave tres veces con DMF, tres veces con DCM (diclorometano) y tres veces con metanol. Secar al vacío para obtener 23,89 g de péptido unido a resina Melanotan I totalmente protegido.
III. Preparación de péptido crudo Melanotan I
Se colocaron 23,89 g de péptido unido a resina Melanotan I completamente protegido en un matraz de fondo redondo. A 0ºC, se añadieron lentamente con agitación 250 ml de un cóctel de escisión preparado previamente (compuesto de TFA:tioanisol:fenol:triisopropilsilano:agua = 82,5:7,5:5:3:2 en volumen). La mezcla se hizo reaccionar a baja temperatura durante 0,5 horas, seguido de reacción a temperatura ambiente durante 2 horas. Luego se filtró la solución de escisión al vacío. Esta solución se añadió lentamente a 2 litros de éter dietílico anhidro enfriado con hielo con agitación. El péptido bruto se aisló por filtración, se lavó tres veces con éter dietílico enfriado con hielo y se obtuvieron 8,55 g de péptido bruto Melanotan I.
IV. Preparación del péptido purificado Melanotan I
Paso 1:Disolver el péptido Melanotan I crudo en 100 ml de agua purificada y filtrar a través de una membrana de 0,45 μm para obtener una solución de péptido crudo.
Paso 2:Purificar el péptido Melanotan I crudo mediante cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC). Utilice una columna de compresión axial dinámica DAC-HB50 con fase móvil A (solución acuosa de ácido trifluoroacético al 0,05%) y fase móvil B (ácido trifluoroacético al 0,05% en acetonitrilo). Realizar elución en gradiente para separación y purificación. Detecte la muestra utilizando un detector UV y recoja la solución peptídica correspondiente al pico objetivo en fracciones.
Paso 3:Después de la purificación por HPLC, se obtienen 180 ml de solución de trifluoroacetato de Melanotan I con una pureza superior al 99%. Concentrar la solución a 50 ml mediante evaporación rotatoria.
Paso 4:Equilibre la columna de cromatografía con agua desionizada y cargue 50 ml de la solución purificada de trifluoroacetato de Melanotan I (pureza >99%). Eluir durante 50 minutos en un sistema de solución acuosa de ácido acético al 2%. Concentrar el producto objetivo recogido a 80 ml mediante evaporación rotatoria. Realice una liofilización previa y una liofilización para obtener finalmente 5,33 g de péptido purificado Melanotan I, con un rendimiento del 32,33%.
Hora de publicación: 2026-01-05