Algunas preguntas y respuestas sobre la solubilidad de los péptidos modificados

1. ¿Qué impurezas hay en las no purificadas de HPLC?

A: Péptidos modificados y impurezas de péptidos no modificados en péptido modificado crudo y desalado: como el péptido modificado de longitud no llena y algunas materias primas como DTT, TFA, etc.

2. ¿Qué impurezas son purificadas por HPLC?

R: El péptido modificado purificado por HPLC todavía tendrá muchas impurezas, y las impurezas suelen ser péptidos cortos y un poco de TFA.

3. ¿Cuánto tiempo es adecuado?

R: La síntesis del péptido modificado debe considerar la longitud del péptido modificado, la carga, la hidrofilia e hidrofobicidad y otros factores. Cuanto más larga sea la longitud total, menor es la pureza y el rendimiento del producto crudo, y mayor es la dificultad de la purificación y la probabilidad de dificultad en la síntesis. Sin embargo, no hay forma de cambiar la secuencia del dominio funcional del péptido modificado, pero para completar la síntesis del péptido modificado, a veces solo se pueden agregar algunos aminoácidos auxiliares en el flujo aguas arriba y aguas abajo del dominio funcional para mejorar la solubilidad y la hidrofobicidad del péptido modificado. Si el péptido modificado es demasiado corto, puede haber problemas en la síntesis. El primer problema es que el péptido modificado sintetizado tiene ciertas dificultades en el proceso de postprocesamiento. El péptido modificado dentro de 5 péptidos generalmente tiene aminoácidos hidrófobos, de lo contrario el postprocesamiento es difícil. Los péptidos modificados por debajo de 15 residuos de aminoácidos generalmente se pueden obtener con rendimiento y rendimiento satisfactorios.

Algunas preguntas y respuestas sobre la solubilidad de los péptidos modificados

4. ¿Cómo juzgar la solubilidad del péptido modificado de la secuencia?

(1) El péptido modificado que contiene una alta proporción de aminoácidos hidrófobos como Leu, Val, IIE, MET, PHE y TRP no es fácilmente soluble en solución acuosa o casi insoluble. Este aminoácido puede ser problemático en purificación o síntesis.

(2) the proportion of hydrophobic amino acids under normal conditions < The proportion of charged amino acids can reach up to 20%. If the N or C of the modified peptide is short, the increase of polar amino acids can also improve the solubility.

5. ¿Por qué es difícil sintetizar CYS, MET o TRP?

R: Los péptidos modificados que contienen CYS, MET o TRP no pueden sintetizarse, y los productos de alta pureza son difíciles de obtener. Esto se debe principalmente al hecho de que estos grupos son menos estables y propensos a la oxidación. El uso y el almacenamiento de estos péptidos modificados requieren un cuidado especial para evitar la apertura repetida de la tapa.

6, ¿por qué algún rendimiento o pureza sintética será muy bajo?

R: Existe una diferencia considerable entre la síntesis de péptidos modificados y la síntesis de cebadores. Hay muy pocos cebadores que no se pueden sintetizar, pero a menudo hay péptidos modificados que no se pueden sintetizar. Tales como Val, Ile, Tyr y TRP, Leu, Phe, GLN y THRM aminoácido cerca o de bucle, los péptidos modificados no pueden estirarse disueltos en el proceso de síntesis, la eficiencia sintética es menor. La eficiencia de la síntesis y la pureza del producto son muy bajas en los siguientes casos, como: repetir pro, ser-ser, repetir ASP, cuatro Gly consecutivos, etc.

7. ¿Cómo se purifica?

R: Los péptidos modificados generalmente se purifican por columna de fase inversa (como C8, C18, etc.) a 214 nm. El sistema de búfer generalmente es una solución que contiene TFA, Ph2.0. Buffera contenía 0.1%TFaindDH2O, y BufferB contenía 1%de TFA/ACN/PH2.0. Se disolvió en Buffera antes de la purificación; Si la solución no es satisfactoria, disuelva con BufferB, luego diluya con Buffera; Para péptidos modificados altamente hidrófobos, a veces se agrega un poco de formicácido o ácido acético.