La purificación de proteínas es el proceso de separación de fracciones de proteínas de un propósito específico de tejidos, células o mezclas de proteínas. La purificación de proteínas no solo debe promover una fuerte pureza de la proteína aislada, sino también mantener la actividad biológica de la proteína. Por lo tanto, es necesario diseñar uno o más esquemas de purificación de combinación de acuerdo con diferentes propiedades de proteínas. La estrategia principal para la purificación de proteínas es explotar las similitudes y diferencias entre diferentes proteínas. Sobre la base de la similitud entre las proteínas, se puede eliminar el material no proteico, y luego la proteína objetivo puede separarse en función de las diferencias de proteínas. Especialmente con el rápido desarrollo de la tecnología de ingeniería genética, aunque muchas proteínas se expresan por recombinación genética, el nivel de purificación de proteínas está directamente relacionado con la pureza y la actividad de la proteína. Por lo tanto, la purificación de proteínas sigue siendo un tema importante en la biotecnología moderna.
Objetivo
Por un lado, el aislamiento y la purificación de las proteínas son particularmente importantes para el estudio en profundidad de la estructura y función de las proteínas, y por otro lado, la separación y la purificación de proteínas también están directamente relacionadas con el efecto de aplicación de las proteínas. Por lo tanto, la purificación de proteínas juega un papel importante en la investigación y la aplicación de la ciencia biológica, y la tecnología de separación y purificación de proteínas también es una tecnología clave en la industria biológica.
El camino
El principio de purificación de proteínas es separar la proteína objetivo con eficiencia, tasa, rendimiento y pureza razonable mientras se mantiene su actividad biológica e integridad química. Los pasos principales incluyen la selección de materiales experimentales, pretratamiento, extracción de proteínas, clasificación de proteínas crudas, clasificación de proteínas finas e identificación de proteínas.
El proceso de purificación debe prestar atención a: 1 para minimizar el impacto en la actividad de las proteínas, como para evitar efectos de pH demasiado altos o demasiado bajos, temperatura alta y metales pesados; 2. Operar a baja temperatura; 3. Trate de mantener el nivel principal de contenido de proteína en la muestra.
Clasificación de
La purificación de proteínas se puede clasificar de acuerdo con el tipo de método de purificación:
I. Método de precipitación, incluida la deposición de sal, usando iones de sal para destruir la capa solidificada en la superficie de la proteína, exponiendo el área hidrofóbica y luego la deposición para lograr el propósito de la purificación preliminar; La deposición orgánica, utilizando solventes orgánicos para reducir la actividad del agua, destruye la película coagulada en la superficie de la proteína, lo que lleva a la precipitación de proteínas. La precipitación es un método de purificación suave, pero la pureza no es alta y puede usarse como un proceso de purificación primario.
Dos, método de diálisis, incluida la bolsa de diálisis y el método de ultrafiltración. Por diálisis y ultrafiltración, se pueden eliminar pequeñas impurezas moleculares, y la solución proteica también se puede reemplazar.
3. Los métodos cromatográficos incluyen cromatografía de gel de tamiz molecular, cromatografía de intercambio iónico, cromatografía de afinidad (cromatografía de afinidad de quelante de metal, cromatografía de proteínas a/g, proteína receptor, sustrato, etc.), cromatografía hidrofóbica, cromatografía inversa y cromatografía líquida de alto rendimiento. Para lograr mejores resultados, a menudo se requiere una combinación de dos métodos cromatográficos, como la cromatografía de afinidad y la cromatografía de intercambio iónico.
Además de los métodos anteriores, existen muchos otros métodos de purificación, como la centrifugación de gradiente de densidad, que son adecuados para la producción de proteínas de alta pureza, pero requieren condiciones experimentales más altas. Los cristales de proteínas son adecuados para el análisis de la estructura biológica, como la transmisión X.
Tiempo de publicación: 2025-07-01